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CTAB 法提取DNA的原理和步骤?

生物 2021-11-23 18:29 已查看[333]次

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(1)取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入1.5 ml Eppendorf管中;

(2)加入800 μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000 r/min,离心15 min;

(3)小心吸取上清液,加入等体积的酚:氯仿(各400μl)溶液,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min;

(4)小心吸取上清液,加入等体积的氯仿,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min;

(5)重复步骤(4)1-2次,以蛋白层不出现为止;

(6)取上清,-20℃沉淀1h,4℃,12000 r/min,离心10 min;

(7)弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀2次;

(8)室温下干燥后(一般干燥5-15 min),溶于30-50 μl DEPC去离子水中,于-20℃或者-70℃下保存备用。

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